HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南:pH值的實際影響
一般情況下,根據色譜柱和樣品的特性,建議采用流動相pH值在2-3的范圍內進行方法開發。
在這一pH范圍下,大多數有機酸的電離將被抑制,而且色譜柱上的硅烷醇基團的電離也將受到抑制。
在這些條件下,堿基會被電離,但是大多數堿性化合物的pKa>7,因此如果在pH太高的情況下抑制電離會有害于大多數的色譜柱。
所以,在其它條件相同的情況下,最好是從較低的pH值開始。
如果您需要在高pH值下操作色譜柱,請確保所選色譜柱在您操作的pH區域內可以保持穩定。
如果低pH電離抑制無法提供可接受的結果,則可以調節流動相pH,以獲得理想的分離效果。然而最具成效的是:調整流動相的有機物含量(%B溶
劑),從而獲得中性和非離子化合物可接受的保留時間;然后調整pH,進而微調離子分析物的保留時間。