HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南:緩沖液的制備
緩沖液有四種常用的制備技術,本文中將分別簡要介紹。
緩沖液配方很容易查找,因此這里并未列出。許多生物化學和化學文獻中均包含緩沖液的相關表格;附錄[3]提供了用于HPLC的緩沖液配方匯編。
卓越的在線工具[4]會提示目標緩沖液的pH值、濃度和體積,然后生成配方。
制備緩沖液的最佳方法是根據配方稱量緩沖液組分,并用水稀釋至所需的體積。
最初,您可能覺得這一過程十分枯燥,但它更為準確,而且通常比pH調節技術更快;在不同時間和實驗室可以實現輕松再現。
該技術提供了所需濃
度和pH值的緩沖液。配制后應檢查pH值,確保未出現任何錯誤。
另一種可選的緩沖液制備技術是:首先制備單獨的酸性和堿性緩沖液(例如分別具有10mM的磷酸和磷酸鹽)。然后將兩種溶液混合,并用pH計監測pH,直至其達到所需的pH值。
這樣不僅可以提供所需濃度的緩沖液,還能夠具有與pH計讀數接近的pH值(通常使用±0.1個pH單位)。
混合酸和堿等摩爾溶液時,可以首先將一種組分配制為所需濃度(例如10mM的磷酸鹽),然后再使用濃酸(例如磷酸)滴定,直至達到所需的pH。該緩沖液將比等摩爾混合物更濃,但目標pH值應正確(在pH計的界限內)。
最后,“improper”緩沖液制備技術應該被提及。
這就是在加入有機溶劑后調節pH值。盡管有機溶劑存在時可以獲得pH值讀數[5-7],但不能直接與水狀pH值的測量結果進行比較,因此pH的數值并不具有實際意義。
這種技術也比其它制備方法更易受其它因素(如有機物比例、溫度)的影響,因此應盡量避免。
盡管如此,對于大多數方法來說,是否按重量、等摩爾混合或采用濃酸滴定等方法配制緩沖液并不會有較大影響,但某些方法會對細微差異較為敏感。
鑒于此,文檔應包含緩沖液制備技術的相關說明。