菲羅門手性色譜柱常見問題
1.使用手性柱時柱壓過高是什么原因造成的呢?
長期超壓會引起柱頭塌陷,反壓上升,柱效下降。
原因:
?流動相或樣品溶液過濾不徹底,固體顆粒堵塞管路或柱頭,會引起柱壓過高。
?樣品中成分在柱頭析出或強烈吸附,會引起柱壓升高。
?流速過快,會引起柱壓過高,特別是當使用粘度高的溶劑,如IPA, EtOH,流速應(yīng)控制在0.1-0.3 ml/min
解決辦法:
?遵循每種柱子的特定的承壓范圍
?徹底過濾流動相及樣品溶液
?樣品預(yù)處理
?更換流動相時,或者剛把柱子剛接上儀器的時候,逐步增加流速
?儀器設(shè)定保護柱壓
2.化合物在手性柱中的“殘留效應(yīng)”經(jīng)常會對影響手性柱的分離度和出峰時間等,該如何處理? 如何沖洗?
殘留物在普通流動相中可長時間地穩(wěn)定保留
?用醇洗滌可除去大部分的堿性殘留物
?用酸洗滌也可除去堿性殘留物
?用堿洗滌可除去酸性殘留物
?推薦分開使用酸性條件手性柱和堿性條件手性柱
3.手性柱譜圖中異構(gòu)體的分離度下降了,可能是什么原因,該怎么辦?
分離度下降的原因有可能是色譜柱以外的色譜條件發(fā)生了變化,或者色譜柱受損柱效發(fā)生了變化。
首先查看是否是因為溫度、流動相成分等外在因素發(fā)生了變化導(dǎo)致分離度下降,如果排除了各種外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降導(dǎo)致的。
如果分離度在短時間內(nèi)急劇下降伴隨柱壓上升, 可能是有強極性溶劑損害了柱子;如果分離度在長時間內(nèi)慢慢下降,可能是柱頭受污染或柱頭塌陷,需要更換保護柱或者更換分析柱。
4.手性柱譜圖中的峰出現(xiàn)裂分,可能是什么原因, 該怎么辦?
峰裂分的原因有可能是色譜柱以外的色譜條件發(fā)生了變化,或者色譜柱受損柱效發(fā)生了變化。 有
時樣品溶液濃度太高,進樣量太大也會裂縫, 這種情況只需減少濃度進樣量即可。
如果排除了各種外在因素,那么色譜柱本身的原因可能是柱頭被污染,或者柱壓太高導(dǎo)致柱頭塌陷。
柱頭污染的話,可以按照說明書采用不同的溶劑溶劑沖洗色譜柱,最好是反方向沖洗;或者更換保護柱。
如果是壓力太高導(dǎo)致柱頭塌陷,那么除了增補填料,基本沒有其他方法補救了,只能更換色譜柱。
5.基線不穩(wěn)定可能是哪些原因,如何解決?
?儀器剛從反相置換到正相系統(tǒng)時,基線會不穩(wěn)定, 只需要多平衡一會兒即可。
?檢測器污染。卸下檢測器,更換透鏡;或者取出透鏡,用甲醇、異丙醇、水或其他溶劑(根據(jù)該儀器平時的使用情況而定)超聲清洗。
安裝時注意透鏡的方向,一面是平面,一面凸透。
?確認使用的兩元(或三元四元)流動相彼此互溶性良好。
?確認正使用的流動相和儀器之前剛用過的流動相彼此互融;若不互融,需要選擇合適的溶劑過渡。
?若噪音很大,有可能是需要更換氘燈。
?柱壓不穩(wěn)定導(dǎo)致的基線不穩(wěn)。
6.柱壓不穩(wěn)定的原因可能有哪些,如何解決?
?泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,可用注射器抽出空氣
?比例閥失效,更換比例閥即可
?泵密封墊損壞,更換密封墊即可
?溶劑中的氣泡,解決的辦法是對溶劑脫氣,通常是超聲法脫氣。
?系統(tǒng)檢漏,找出漏點,密封即可。
?梯度洗脫,這時壓力波動是正常的。