Comixsil和Comixshell系列色譜柱使用說明書
菲羅門公司的Comixsil和Comixshell為創新的混合作用（Mixed-mode）液相色譜柱，通過在碳鏈上嵌入離子基團，可以實現 在不同的流動相條件下提供離子交換/排阻、Hilic和疏水等作用，可以為大極性化合物和成分之間性質差異大的樣品的分析提供新的解決方案。
為了延長Comixsil和Comixshell系列色譜柱的使用壽命，請仔細閱讀以下操作要點：
一、色譜柱操作注意事項
1. 避免在Comixshell CARP、Comixsil ACRP、Comixsil RPAC、Comixsil HCS、Comixsil RP-100以及Comixsil RP-CX這幾種固定相上使用醇類流動相，因為這可能與固定相發生酯化反應從而帶來重現與保留的變化，即一般情況下流動相中的有機相只用乙腈，但不限制THF以及其它類溶劑在流動相中的添加使用；
2. 在使用Comixshell CARP、Comixsil ACRP、Comixsil RPAC、Comixsil HCS、Comixsil RP-100以及Comixsil RP-CX這幾種固定相時，在連接色譜柱前需要先用不含醇的流動相沖洗管路，防止儀器體系中可能殘存的醇類溶劑進入色譜柱；
3. 不要超出Comixsil和Comixshell系列色譜柱的pH范圍使用（見要點四），這兩個系列色譜柱需要始終保存在酸性的緩沖鹽或含有酸的體系中；
4. 不能將色譜柱保存在含有TEA或TFA等調節劑的流動相中，這可能會造成色譜填料的改性而影響實驗結果的重現；
5. 為了獲得好的重現性，需要在進樣前進行充分的柱平衡；
6. 為了獲得好的重現性，強烈推薦使用柱溫箱以維持色譜柱在運行過程中溫度的穩定，所有Comixsil和Comixshell系列柱的溫度范圍是0~60 ℃；
7. Comixsil系列柱的最高耐受壓力為5000 Psi（3 μm及5 μm產品），Comixshell系列柱的最高耐受壓力為10000 Psi（2.7 μm 產品），任何時候不能超過這個壓力，否則可能會造成填料損壞或漏液；
8. 一般情況下色譜柱必須按照標簽的方向指示運行。如果有必要對色譜柱進行反沖去除篩板和柱頭污染的話，必須將流速降至0.1 ml/min 進行清洗（清洗方法見要點三）；
9. 可以使用PEEK或金屬接頭連接色譜柱，為了降低柱外體積建議使用PEEK管路和PEEK手緊接頭以達到最好的匹配。
二、色譜柱的平衡方法
配置一瓶濃度為100 mM 的甲酸銨溶液（pH 3.2）；
1. 新色譜柱第一次啟用時，請使用乙腈：100 mM 甲酸銨（pH 3.2）= 75：25 沖洗至少20-30 個柱體積，直到基線平穩后再用方法中的流動相起始條件平衡后再進樣；
2. 當使用中的色譜柱在含不同酸的流動相之間切換（如甲酸切換成 TFA）時，請使用乙腈：100 mM 甲酸銨（pH 3.2）= 75：25 過渡10 個柱體積；
3. 當使用中的色譜柱在含酸和銨鹽（甲酸銨/乙酸銨）的流動相之間相互切換時，可以直接相互切換，但要注意平衡時間需要適當延長；
4. 當使用中的色譜柱在含不同的銨鹽的流動相之間切換時，可以直接相互切換，但要注意平衡時間需要適當延長；
5. 當需要使用含磷酸鹽的流動相時，請先用乙腈/100 mM 甲酸銨（pH 3.2）（比例隨方法中的比例而定）平衡10 個柱體積，需要注意磷酸鹽與乙腈的比例，防止鹽析現象。
三、色譜柱清洗方法
1. 當色譜柱在反相混合模式使用時（即方法流動相中有機相比例較低時），可使用200 mM 甲酸銨 : 乙腈 = 30 : 70 或 700 mL 乙腈+300 mL 水+3 mL TFA 或磷酸作為流動相沖洗20-30 個柱體積；
2. 當色譜柱在HILIC 混合模式使用時（即方法流動相中有機相比例較高時），可使用100 mM 甲酸銨 : 乙腈 = 70 : 30 或300 mL 乙腈+700 mL 水+3 mL TFA 或磷酸作為流動相沖洗20-30 個柱體積。 建議在檢測完樣品后，先按照這個方法清洗色譜柱后再按要求保存（見要點四）。
四、色譜柱的pH 使用范圍和保存條件
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色譜柱型號 |
pH 范圍/建議操作范圍 |
短期保存 |
長期保存 |
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Comixshell CARP |
1.5-7.5/2.0-6.5 |
20 mM 甲酸銨（pH 3.2）/乙腈=25/75 |
乙腈/水/甲酸=75/25/0.1 |
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Comixsil ACRP |
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Comixsil RP-CX Comixsil RP-100 Comixsil RPAC |
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Comixsil HCS |
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Comixshell AIRP |
1.5-6.0/2.0-5.0 |
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Comixsil RP-AX |
五、色譜柱鍵合的類型、存在的主要作用機制
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色譜柱型號 |
鍵合類型 |
存在的主要作用機制 |
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Comixshell CARP |
弱陰離子+疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+疏水+HILIC |
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Comixsil ACRP |
弱陰離子+弱陽離子+親水鏈 |
陰/陽離子交換/排阻+HILIC |
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Comixsil RPAC |
弱陰離子+弱陽離子+疏水鏈 |
陰/陽離子交換/排阻+疏水 |
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Comixsil RP-CX |
弱陰離子+疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+疏水 |
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Comixsil RP-100 |
弱陰離子+疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+疏水+HILIC |
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Comixsil HCS |
弱陰離子+短疏水鏈 |
陽離子交換（陰離子排阻）+HILIC |
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Comixshell AIRP |
弱陽離子+疏水鏈 |
陰離子交換（陽離子排阻）+疏水 |
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Comixsil RP-AX |
弱陽離子+疏水鏈 |
陰離子交換（陽離子排阻）+疏水 |
