定量與校正
當(dāng)化合物已知,像臨床試驗(yàn)中,收集很多獨(dú)立樣品的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),服用的藥物和其目標(biāo)代謝物已經(jīng)完全表征,以上情況下不需要全掃描質(zhì)譜圖。但是,在復(fù)雜生理性的混合物中,要求非常高的靈敏度,因此設(shè)置質(zhì)譜儀僅監(jiān)測特定m/z值。因?yàn)殡x子連續(xù)流過三重或串聯(lián)四極桿,所以沒有必要限制離子流進(jìn)入質(zhì)量分析器。與之相反,離子阱有明確的有限容積,因此,需要防止過多的離子進(jìn)入離子阱。不限制離子強(qiáng)度,結(jié)果在質(zhì)譜圖中會出現(xiàn)不想要的或意外的峰,這樣當(dāng)試圖在GC/MS譜庫中搜尋EI譜時(shí)將非常麻煩。離子阱的設(shè)計(jì)已經(jīng)發(fā)生很大的改變,允許外部電離(在質(zhì)量過濾器外獲得離子,隨后離子注入離子阱),而不是內(nèi)部電離(在質(zhì)量過濾器電離)。設(shè)計(jì)的變更帶來了一個(gè)問題,在阱中會發(fā)生離子分子反應(yīng),但同時(shí)對離子流有一定限制。甚至在MRM模式下,這種總離子流的自動調(diào)節(jié)機(jī)制會引起對單個(gè)色譜峰的不規(guī)則采樣間隔。因此,最終,在復(fù)雜基質(zhì)的痕量分析中,離子阱具有一定局限性,尤其當(dāng)要求有極高的準(zhǔn)確度和精確度時(shí),在這種情況下,因?yàn)閿?shù)據(jù)必須具有合理性,或必須符合定量分析的準(zhǔn)確度和精確度的嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。
MS定量分析時(shí),通常需要使用內(nèi)標(biāo)化合物。內(nèi)標(biāo)用于控制樣品提取、LC進(jìn)樣和電離等過程的誤差。如果沒有內(nèi)標(biāo)物,各種重復(fù)試驗(yàn)中的RSD將比有內(nèi)標(biāo)物的重復(fù)實(shí)驗(yàn)高出10倍。最好的內(nèi)標(biāo)物是目標(biāo)分子的同位素標(biāo)記物。雖然合成這類分子非常昂貴,但是其有類似的提取回收率,色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜電離響應(yīng)等。
校正
質(zhì)譜學(xué)家使用校正化合物調(diào)整質(zhì)量校正比例和離子相對強(qiáng)度,與已知被測物相匹配。所有質(zhì)譜儀上都需進(jìn)行這一操作,因?yàn)殡娮印⒈砻娴那鍧嵍群蛯?shí)驗(yàn)室的周圍條件可能影響質(zhì)譜儀的有效測量能力。對一些在低分辨質(zhì)譜儀上進(jìn)行的要求不高的分析來說,校正可以較少,但儀器響應(yīng)高低的檢查要經(jīng)常做。但是,高的質(zhì)量準(zhǔn)確度則要求對質(zhì)量精度隨時(shí)監(jiān)控。
對GC/MS,常用的校正化合物是FC-43,也稱為過氟三丁烷胺。其它的校正化合物混合物也被用于調(diào)整高分辨率質(zhì)譜的校正比例。碘化銫鈉(NaCsI)和聚乙二醇混合物是LCMS的校正物。在LCMS兼容的溶劑中,NaCsI以穩(wěn)定狀態(tài)流入或加入到質(zhì)譜儀中,在整個(gè)4000Da的范圍內(nèi)產(chǎn)生一系列單同位素峰,可用于質(zhì)量校正。含有可選擇的標(biāo)準(zhǔn)肽、蛋白質(zhì)、基質(zhì)和溶劑等,用于對MALDI質(zhì)譜儀進(jìn)行校正、調(diào)諧和靈敏度檢測的有效工具包已經(jīng)商品化。Sigma Aldrich®公司已經(jīng)這樣一種用于蛋白質(zhì)和肽復(fù)雜混合物的分析(700到66000Da)的一套試劑盒。
質(zhì)量鎖定
對于一些在TOF或類似的高質(zhì)量精度的儀器上進(jìn)行的對質(zhì)量精度要求較高的測定時(shí),需要隨時(shí)嚴(yán)格監(jiān)控儀器狀態(tài)。溫度的微小變化,可能導(dǎo)致質(zhì)量數(shù)幾個(gè)ppm的偏差。根據(jù)使用電離類型,使用一些一直存在的已知污染離子,可實(shí)現(xiàn)連續(xù)的質(zhì)量校正。或者在整個(gè)分析過程中,對離子流定期取樣,以實(shí)現(xiàn)隨時(shí)校正。如果在色譜柱后,質(zhì)譜進(jìn)口之前的LC洗提液中,添加用于質(zhì)量鎖定的校正物,這通常引起不可控的結(jié)果,比如離子抑制,質(zhì)量數(shù)干擾和溶劑效應(yīng)等。TOF型質(zhì)譜儀能實(shí)現(xiàn)較低ppm的質(zhì)量精度,對于傅里葉變換離子回旋共振(FTICR)質(zhì)譜儀,如果控制進(jìn)入系統(tǒng)的離子數(shù),則可達(dá)到更高的質(zhì)量精度。通過質(zhì)量鎖定對質(zhì)量數(shù)實(shí)時(shí)校正可以去除用事先已建立的質(zhì)量比例校正的質(zhì)量誤差。信號較弱有時(shí)是另一易被忽略的原因,可通過對LC峰各采樣點(diǎn)進(jìn)行平均進(jìn)行校正。雙電噴霧源是蛋白質(zhì)組學(xué)研究或低水平代謝物鑒定的理想電離方式。這種方法使用兩個(gè)獨(dú)立ESI探針,使用可編程的步進(jìn)馬達(dá)驅(qū)動的振蕩阻隔板,從校正噴霧(或參照)流中取樣。在預(yù)設(shè)的間隔時(shí)間內(nèi)從對照噴霧取樣,并確保樣品采集任務(wù)循環(huán)。取樣阻隔板的位置被實(shí)時(shí)監(jiān)測,以便指示出兩液體的入口,對照和樣品數(shù)據(jù)存儲在獨(dú)立的文件中。這種設(shè)計(jì)減少了被測物和參照物的相互影響。