豬肉中喹諾酮類藥物的測定-固相萃取法+LC-MS檢測
本方案建立了以C18固相萃取柱(貨號：9B-T001-06500，描述：SuperClean C18 500mg/6ml, 30支/包)對豬肉樣品中4種喹諾酮類藥物萃取凈化方法，進行低中高三水平基質加標，都能獲得滿意的實驗結果，回收率介于84%~115%之間，RSD值小于10 %。
一、樣品提取
準確稱取粉碎均勻的豬肉樣品2.0 g于干凈離心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液，再加入1 g NaCl，2500 r/min渦旋提取10 min，8000 r/min離心2 min，取上清液5 mL氮吹近干，用5 mL 5 %甲酸水溶液復溶，待凈化。
二、樣品凈化
活化：5 mL甲醇，5 mL水 上樣：上述待凈化液 淋洗：5 mL 10 %甲醇水
洗脫：5 mL 10 %氨水甲醇收集洗脫液，氮吹近干，初始流動相復溶，上機。
三、基質標準曲線溶液的制備
選同類型空白豬肉樣品，按上述前處理方法進行操作，取適量的標液配制成合適濃度的基質曲線。
四、儀器條件
（1）色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色譜柱：菲羅門 Titank C18 3 μm 50*2.1 mm(貨號：FMB-5559-BONU)
流動相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇（0.1 %甲酸）
洗脫方式：梯度洗脫，見表1
流速：0.3 mL/min
柱溫：30℃
進樣量：5 μL
表1 梯度洗脫程序
|
時間/min |
A/% |
B/% |
|
0.00 |
98 |
2 |
|
0.25 |
98 |
2 |
|
2.00 |
70 |
30 |
|
4.00 |
70 |
30 |
|
4.20 |
30 |
70 |
|
6.20 |
30 |
70 |
|
6.50 |
2 |
98 |
|
7.80 |
2 |
98 |
|
8.00 |
98 |
2 |
|
10.00 |
98 |
2 |
（2）質譜條件
離子源：HESI
電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：40 arb
輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：380 ℃
輔氣溫度：350 ℃
表2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（*為定量離子）
|
序號 |
名稱 |
保留時間/min |
母離子 |
子離子 |
|
1 |
馬波沙星 |
3.20 |
363.1 |
320.0*、342.0 |
|
2 |
培氟沙星 |
3.48 |
334.2 |
290.1*、316.1 |
|
3 |
達氟沙星 |
3.92 |
358.2 |
314.1、340.0* |
|
4 |
二氟沙星 |
4.24 |
400.2 |
299.0、356.1* |
五、實驗結果
表3 4種喹諾酮類加標回收實驗結果
|
目標物 |
10.0 μg/kg |
20.0 μg/kg |
50.0 μg/kg |
||||
|
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
回收率 （%） |
RSD（%） n=3 |
||
|
馬波沙星 |
88.8 |
8.04 |
107 |
2.72 |
90.7 |
6.19 |
|
|
培氟沙星 |
84.2 |
8.63 |
94.5 |
8.79 |
85.7 |
2.29 |
|
|
達氟沙星 |
90.9 |
7.94 |
115 |
6.17 |
96.8 |
6.25 |
|
|
二氟沙星 |
91.7 |
7.89 |
107 |
5.29 |
94.4 |
5.01 |
|
豬肉中喹諾酮類藥物的測定-固相萃取法+LC-MS檢測
圖1 添加水平為50.0 μg/kg時4種喹諾酮類的總離子流圖
