App ID: FLM-T230008
方法:自定
色譜柱:Titank HILIC 5μ 250*4.6mm(貨號:FMG-5568-EONU)
流速:1.0 mL/min
柱溫:35℃
檢測器:UV 195nm
流動相: 乙腈-20mM 磷酸氫二鉀(pH7.5)=(70:30)
圖譜
方法說明:原方法使用氨基柱在該流動相下進行分析,但氨基柱普遍損耗都較大;上述方法改用 Titank HILIC
色譜柱替代原先的氨基柱,其分析效果也較好,該柱的穩定性及壽命均相對于氨基柱好。
1. 試劑及設備
硫酸氨基葡萄糖試劑盒、離心機、比色皿、移液器、吸管、去離子水等。
2. 樣品制備
將待測樣品溶解在去離子水或緩沖液中。
3. 操作步驟
(1) 取一支試管,加入5μl待測樣品和1ml硫酸氨基葡萄糖試劑,混勻,室溫下靜置10分鐘,使產生的顏色穩定;
(2) 在比色皿中加入1ml去離子水,校零,記錄比色皿編號;
(3) 將試管離心,離心3000rpm,2分鐘;
(4) 用移液器取離心后上清樣液,吸至0.2mg/ml線,放入對應的比色皿中,注意避免氣泡;
(5) 使用比色鏡或分光光度計,在546nm(或者530nm)波長下讀取吸光度(A);
(6) 按照試劑盒附帶的說明書計算樣品中硫酸氨基葡萄糖的含量。
4. 注意事項
(1) 確保所有勾兌操作在10分鐘內完成;
(2) 離心后,只取上清液測定,避免樣品殘留;
(3) 操作過程中,禁止口試,嚴格遵守實驗室有關安全規定。