App ID: FLM-T230006
方法:自訂
色譜柱:Titank HILIC 3μ 150×4.6mm(貨號:FMF-5567-EON)
流動相:10mM 磷酸二氫鉀(pH 4.3)-乙腈=(20:80)
流速:0.6ml/min
檢測波長:205nm
柱溫:45℃
方法說明:使用 Titank HILIC 色譜柱可較好分離左卡尼汀及雜質 A,注意流動相采用高比例乙腈,而磷酸鹽在高比例乙腈中易鹽析,流動相應采用預混,不可采用在線混合。
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手性色譜柱的選擇:由于左卡尼汀為手性分子,其雜質A也是手性的,因此需要使用手性色譜柱對其進行分離。常見的手性色譜柱有手性固定相型與手性填充劑型兩種,根據實際需要選擇合適的手性柱。
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流動相的優化:流動相的組成及pH對于手性化合物的分離效果有很大影響。需要通過試錯法進行調整,根據試驗結果優化流動相的成分及pH值。流動相通常由有機溶劑(如甲醇、乙腈等)和緩沖液組成。
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柱溫的控制:柱溫的升高有助于提高柱效和分離效率,但對于左卡尼汀和其雜質A,溫度過高會導致兩者失活,因此需要在不影響分離效果的前提下,控制好柱溫,一般為室溫或略高于室溫。
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檢測方法的選擇:由于左卡尼汀和雜質A在純水中不易被檢測到,因此需要選擇合適的檢測方法,如紫外檢測、熒光檢測、電化學檢測等,以提高檢測的靈敏度和準確性。同時,需要確保檢測方法與色譜柱相兼容。
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樣品預處理:對于液體樣品,需要通過凈化或者液液抽提等方式來去除樣品中的雜質,使得左卡尼汀和其雜質A的含量大致相等。對于固體樣品,需要進行適當的提取、萃取或者洗脫等處理,使得樣品中的化合物含量處于相同的數量級。
以上是左卡尼汀及其雜質A的色譜分離方法的關鍵要點,實際操作過程中需要根據具體情況做出適當調整。