液相色譜柱污染后,需要進行清洗和再生。以下是清洗和再生的方法:
1. 反相色譜柱的清洗:
(1)分別用甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱體積,使之通過柱子。然后用流動相平衡(通常仍用20倍柱體積),柱一般將恢復正常。
(2)如果選擇性仍和以前不一樣,則表明還有其他雜質留在柱子里,這時應考慮更加嚴格的清洗:先用20倍柱體積的水,再用相同體積0.05mol/L硫酸,最后用流動相溶劑。酸洗常能洗下有機溶劑所不能洗下的剩余雜質。
(3)對于嚴重污染的反相柱,只能采用再生的方法。
2. 正相色譜柱的清洗:
(1)用正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇等溶劑做流動相,順次沖洗,每種流動相流經色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,可降低流速,避免壓力過高)。注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,再以相反的次序沖洗至正己烷,所有的流動相必須嚴格脫水。
3. 離子交換色譜柱的清洗:長時間在緩沖溶液中使用和進樣,將導致色譜柱離子交換能力下降,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。
需要注意的是,如果色譜柱污染嚴重或不確定污染程度,建議咨詢菲羅門相關技術人員或專業機構以進行更詳細的清洗和再生。