LC-MS(液相色譜-質譜聯用)方法開發指南如下:
1. 明確目標和要求:首先,確定分析的目標和要求,包括待測物的性質、濃度范圍、分離和檢測的要求等。
2. 選擇合適的液相色譜條件:根據待測物的性質,選擇合適的液相色譜條件,包括色譜柱、流動相、流速、梯度等。要確保待測物在色譜柱上有良好的分離效果,同時盡量減少雜質的干擾。
3. 優化質譜條件:根據待測物的性質,優化質譜條件,包括離子源、掃描模式、電壓、溫度、離子對等。要確保待測物在質譜上有良好的響應和穩定性,同時盡量減少背景噪聲的干擾。
4. 確定定性和定量方法:根據待測物的性質和分析要求,確定定性和定量方法。常用的定性方法包括分子量確認、結構式確認等;常用的定量方法包括外標法、內標法等。
5. 驗證方法:通過實際樣品的測定,驗證所開發方法的準確性和可靠性。可以使用標準品或已知濃度的樣品進行驗證,比較測定結果與理論值的差異,評估方法的準確性和精密度。
6. 優化方法:根據驗證結果,進一步優化方法,提高分析的準確性和靈敏度。可以通過調整色譜和質譜條件、優化樣品前處理方法等手段進行優化。
7. 建立標準操作程序(SOP):將所開發的方法標準化,建立標準操作程序,確保分析過程的可重復性和可靠性。SOP應包括樣品前處理、色譜和質譜條件、定性和定量方法等步驟。
總之,LC-MS方法開發需要綜合考慮待測物的性質、分析要求、儀器性能等因素,通過不斷優化和驗證,建立準確、可靠的分析方法。