在HPLC(高效液相色譜)操作中,兩種典型的錯誤操作包括:
1. **對流動相進行不必要的過濾**:通常,經過凈化系統處理得到的HPLC級溶劑和水已經足夠干凈。如果再次進行額外的過濾,可能會引入不必要的化學污染。然而,當使用離子對試劑、低純度緩沖劑或高鹽含量的流動相時,或者當水源質量不佳導致凈化系統流出的水不夠干凈時,仍需要對流動相進行過濾。
2. **使用不適當的色譜柱**:一種常見的錯誤是選擇粒徑為5μm的顆粒填充的色譜柱,盡管多年來這種規格的色譜柱一直作為標準使用。實際上,3μm粒徑顆粒填裝的色譜柱(150mm×4.6mm)具有更好的分離效果及更短的分析時間。然而,需要注意的是,3μm粒徑顆粒填裝的色譜柱的進口孔隙更小,更容易被“臟”的樣品堵塞。另外,盡管4.6mm內徑的色譜柱長期以來一直作為HPLC分析柱的“標準”,但在努力減少溶劑消耗和節約樣品的目標下,許多實驗室已經開始轉向使用3.0mm內徑的色譜柱。
為了避免這些錯誤,建議用戶在使用HPLC時仔細閱讀并遵循相關儀器和試劑的說明書,并根據實驗條件和需求進行適當的調整和優化。同時,定期對儀器進行維護和保養,確保其在最佳狀態下運行。