當色譜柱進空氣時,可以采取以下步驟來解決問題:
### 一、理解現象
首先,需要明確的是,如果流動相沒了,泵的確會吸進去一些空氣,但并不會持續地讓空氣流經整個系統。HPLC(高效液相色譜)的泵是專門設計來吸取液體的,一旦空氣進入,泵就會失去灌注(lose prime)并停止工作。因此,雖然一些氣泡可能會進入柱子,但這種情況不會一直持續。
### 二、處理措施
#### 1. 排氣準備
* **取下色譜柱**:在排氣之前,最好將色譜柱從系統中取下來,以避免在排氣過程中對色譜柱造成不必要的沖擊。
* **更換流動相**:換上新的、徹底脫氣后的流動相。脫氣是為了減少流動相中的溶解氣體,避免在排氣過程中產生更多的氣泡。
#### 2. 清除泵和管道中的空氣
* **打開排氣閥**:進行正常灌注(prime the pump),確保泵能夠重新建立灌注。對于某些型號的儀器,可能需要使用注射器進行手動灌注。
* **設定高流速**:設定一個較高的流速(如10 mL/min),并運行幾分鐘,以徹底清除泵里面以及管道里面殘留的空氣。
* **調整流速**:將流速調至1 mL/min,并關閉排氣閥,繼續運行直到徹底沒有氣泡排出。
#### 3. 清除色譜柱中的空氣
* **連接柱子**:將色譜柱進口端連接好,出口端不要接檢測器,而是接上一段管道,并用燒杯或廢液瓶收集排出來的流動相。
* **逐步增大流速**:啟動泵并逐步增大流速,直到柱壓達到3000-4000 psi(高壓能夠將氣泡壓縮回溶液并排出柱子)。持續運行10分鐘左右,直到沒有氣泡從柱子的尾端排出。
#### 4. 沖洗系統
* **更換流動相**:將流動相換成100%的甲醇或乙腈,這兩種有機溶劑的粘度相對較低,有助于清除系統管道和色譜柱中的殘留空氣。
* **沖洗柱子**:用甲醇或乙腈沖洗色譜柱一段時間,確保柱子中的空氣被完全清除。
### 三、后續檢查
* **檢漏**:排氣完成后,要特別注意檢查系統是否有泄漏。如果沒有觀察到明顯的泄漏,要注意觀察泵在正常運行下的柱壓是否正常和穩定。如果柱壓沒有問題,就說明泵和系統是正常的。
* **更換密封墊**:如果觀察到柱壓偏低或波動,可能是密封墊磨損所致,此時需要更換密封墊。
### 四、注意事項
* 在處理過程中,要避免對色譜柱造成物理損傷或化學污染。
* 如果色譜柱因長期儲存而變干燥,也可以使用上述方法使其恢復良好狀態。
* 不同的色譜柱和儀器可能需要不同的處理方法和步驟,因此在實際操作中應根據具體情況進行調整。
通過以上步驟,可以有效地解決色譜柱進空氣的問題,并確保色譜系統的正常運行和分析結果的準確性。