使用C8和C18色譜柱時,需要避免高水相流動相,這主要是由于以下幾個方面的原因:
### 一、固定相的非極性特性
* C8和C18色譜柱的固定相表面鍵合有C8或C18烷基鏈,這些烷基鏈具有類似油脂的非極性特性。在反相色譜法中,分析物在流動相和固定相之間進(jìn)行分配以實現(xiàn)分離。由于固定相的非極性,它們通常適用于分析非極性或弱極性分析物。
### 二、高水相流動相的影響
1. **潤濕性差**:
* 類似油脂的非極性特性使得C8或C18固定相在高比例水相中不能被有效潤濕。流動相中的水分子由于具有較高的表面張力,往往只通過固定相孔之間的空間,而無法充分潤濕孔內(nèi)的固定相。
* 當(dāng)流動相中有一定比例的有機溶劑(如乙腈或甲醇)時,這些溶劑對C8或C18固定相具有良好的潤濕性,有助于分析物在色譜柱上的保留和分離。
2. **固定相塌陷**:
* 如果使用高比例的水相作為流動相,C8或C18固定相可能會因為表面脫水而塌陷,這種現(xiàn)象稱為固定相塌陷、鏈折疊或固定相打結(jié)。固定相塌陷會導(dǎo)致保留時間減少和保留時間的不重復(fù)性,嚴(yán)重影響分離效果。
3. **色譜柱性能下降**:
* 高水相流動相還可能導(dǎo)致色譜柱上的樣品殘留增加,影響后續(xù)分析的準(zhǔn)確性。此外,硅膠基質(zhì)色譜柱的硅膠粒子在高水相環(huán)境中可能會發(fā)生溶解,導(dǎo)致色譜柱性能下降甚至損壞。
### 三、保留效果與分離效果
* 使用高比例水相流動相時,極性較強的化合物可能會與色譜柱之間的相互作用增強,導(dǎo)致拖尾現(xiàn)象增加,影響分離效果。
* 保留時間的減少和保留時間的不重復(fù)性也會使分析結(jié)果的可靠性降低。
### 四、替代方案與建議
* 如果需要使用水性或高比例水相的流動相,可以考慮選擇其他類型的色譜柱,如未封端色譜柱、短鏈烷基色譜柱、極性嵌入烷基相色譜柱或?qū)捒讖较嗌V柱等。
* 在方法開發(fā)階段,應(yīng)仔細(xì)選擇合適的色譜柱和流動相條件,以最大限度地提高化合物的分離效果和保護(hù)色譜柱免受損壞。
綜上所述,使用C8和C18色譜柱時避免高水相流動相是為了保護(hù)色譜柱的固定相不受損害,確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。