火腿中胭脂紅和誘惑紅檢測的固相萃取方法
(菲羅門專用的食品中色素提取分析 Polyclean X-PAmide 小柱)
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC 法作為分析方法,檢測火腿中胭脂紅和誘惑紅的含量。
該方法可簡化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用,操作簡便。
二、實驗目標物
胭脂紅(CAS:569-64-2),誘惑紅(CAS: 25956-17-6)。
三、應用范圍
本方法適用于火腿或者豬肉中多種合成著色劑的檢測的 HPLC 檢測及確證。
四、實驗材料
NuAnalytical Polyclean X-PAmide 小柱 500mg/6mL(9B-P006-06500)。
五、實驗方法
1、樣品提取
準確稱取粉碎好的火腿 10.0 g 于 50 mL 離心管中,加入 30 mL 氨化乙醇溶液(氨水:乙醇:水=20:70:10), 渦旋 1 min,4000 r/min 離心 5 min,上清液轉移至 100 mL 雞心瓶中,50 ℃ 旋蒸至 2 mL 左右(注意容易暴沸),轉移至 15 mL 離心管中,加入水至 10 mL。樣品溶液待凈化。
2、SPE 柱凈化
(1)活化:Polyclean X-PAmide 小柱使用前用 6 mL 甲醇、6 mL 水活化。(使用固相萃取裝置,流速 1-2 滴/秒。)
(2)上樣和洗脫:在 Polyclean X-PAmide 小柱上加入 10 mL 待凈化樣品,控制流速在 1-2 滴/秒,棄去流出液。依次用 6 mL 甲醇、6 mL 水淋洗,棄去流出液,抽干。然后用 6 mL 5%
氨化甲醇進行洗脫,控制流速在 1-2 滴/秒,收集洗脫液。
(3)重新溶解:洗脫液于 45 ℃氮吹至干,加 1 mL 水定容,混勻,過 0.45 μm 水系濾膜(注意防止不合適的濾膜吸附一定量的色素而造成損失),待上機測試。
3、HPLC 條件
設 備:Waters Alliance 2690
色譜柱 :Neptune C18 (4.6×250 mm, 5 μm) 檢測器 :Waters 2487 紫外檢測器
流動相:A:甲醇 B:0.02mol/L 乙酸銨緩沖溶液洗脫方式:梯度洗脫
表 1 梯度洗脫條件
時間/min |
A% |
B% |
-- |
5 |
95 |
3 |
20 |
80 |
10.00 |
60 |
40 |
13.00 |
60 |
40 |
15.00 |
5 |
95 |
18.00 |
5 |
95 |
流速:1.0 mL/min 檢測波長:254 nm 進樣體積:20 μL 六、實驗結果
1、0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅的添加回收結果
表 2 0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅的添加回收結果
名稱 |
回收率(%) |
平均回收率 (%) |
RSD(%) |
||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|||
胭脂紅 |
95.3 |
98.1 |
92.4 |
90.4 |
98.3 |
94.9 |
3.66 |
誘惑紅 |
93.5 |
96.1 |
90.9 |
88.8 |
95.9 |
93.1 |
3.42 |
2、添加水平為 0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為 0.2 mg/kg 火腿中胭脂紅和誘惑紅檢測的液相色譜圖
注:Polyclean X-PAmide 小柱適合各種食品基質(肉類,酒,飲料)中的合成色素的凈化提取。