動(dòng)物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留檢測(cè)的固相萃取方法
(PolyClean X-HLB)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
本法為以 Polyclean X-HLB(60mg/3mL)柱開發(fā)的針對(duì)動(dòng)物源食品(豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品)中硝基呋喃類代謝物殘留檢測(cè)的樣本前處理凈化方法,Polyclean X-HLB
(60mg/3mL)柱凈化效果良好,回收率滿足測(cè)試要求,重現(xiàn)性好,與知名廠商同型號(hào)柱性能相當(dāng)。目標(biāo)物采用反相高效液相色譜-紫外為檢測(cè)手段。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
四種硝基呋喃類代謝物:呋喃它酮代謝物 5-嗎啉甲基-3-氨基-2-噁唑烷基酮(AMOZ, CAS:43056-63-9)、呋喃西林代謝物氨基脲(縮寫 SEM,CAS:563-41-7)、呋喃妥因代謝物 1-氨基-2-內(nèi)酰脲(縮寫 AHD,2827-56-7)和呋喃唑酮代謝物 3-氨基-2-噁唑烷基酮(縮寫AOZ,80-65-9)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于動(dòng)物源性食品包括豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品(魚類、蝦蟹類和貝類)中硝基呋喃類代謝物殘留檢測(cè)。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 20752-2006 豬肉、牛肉、雞肉、豬肝和水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》和農(nóng)業(yè)部公告《農(nóng)業(yè)部 1077 號(hào)公告-2-2008 水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物殘留量的測(cè)定》
五、實(shí)驗(yàn)材料
NuAnalytical Polyclean X-HLB 固相萃取柱 60mg/3mL。六、實(shí)驗(yàn)方法
1、 樣品待測(cè)溶液制備
(1)樣品稱取脫脂
稱取待測(cè)樣品 2g(精確到 0.01g),置于 50mL 離心管中加入 10mL 甲醇-水混合物(2+1),振蕩混勻 10min,4000r/min 離心 10min,吸取清液棄掉、離心管中試樣備用。
(2)水解衍生化
向上述離心管中加入 20mL0.2mol/L 鹽酸,振蕩混勻 10min,后加入 0.4mL 0.05mol/L 2-硝基苯甲醛(0.075g 2-硝基苯甲醛溶于 10mL 二甲亞砜),渦旋混勻 1min,置于 37℃恒溫振蕩器水浴中避光反應(yīng) 16h。
將上述衍生液,放置至室溫,加入 5mL0.1mol/L 磷酸氫二甲溶液,用 1mol/L NaOH 調(diào)節(jié) pH 到約 7.4,4000r/min 離心 10min,上清液(對(duì)脂肪含量多的試樣,可加入 5mL 正己烷,振蕩 2min,4000r/min 離心 5min 吸取并棄掉正己烷)備 HLB 柱萃取凈化用。
2、活化
依次用 5mL 甲醇、10mL 水活化。
3、上樣和洗脫
取上述備用液控制流速小于 2 mL/min 過柱。待樣液全部通過后用 10mL 水淋洗上樣柱, 棄去全部流出液并真空抽干,最后用 5 mL 乙酸乙酯洗脫柱子上的待測(cè)成分。
4、重新溶解
收集洗脫液,于 40 ℃氮?dú)獯蹈?,?zhǔn)確加入 1.0 mL 乙腈/水(1/2,V/V)溶液溶解殘余物混勻,0.22 μm 濾膜過濾,供高效液相色譜測(cè)定。
5、HPLC 條件
色譜柱:SuperLu C18 (250×4.6mm,5μm)
檢測(cè)器:Waters 2487 紫外雙波長(zhǎng)檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng):275nm
流動(dòng)相:A-乙腈 B- 0.01mmol/L 乙酸銨(0.77g 乙酸銨,1000mL 水溶解,甲酸調(diào) pH
3.5 )
洗脫方式:梯度洗脫,梯度條件如下:
時(shí)間/min
A/%
B/%
0.01
15.0
85.0
16.50
40.0
60.0
17.00
15.0
85.0
22.00
15.0
85.0
柱溫:30℃ 流速:1.0 mL/min 進(jìn)樣量:20μL七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結(jié)果
表 1 添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的添加回收結(jié)果
回收率(%)
代謝物衍生物名稱
平均回收率(%)
RSD(%)
1
2
3
NP-AMOZ(呋喃它酮代謝物衍生物)
97.2
102.0
97.4
98.9
2.7
NP-AOZ(呋喃唑酮代謝物衍生物)
98.2
98.8
94.6
97.2
2.3
NP-AHD(呋喃妥因代謝物衍生物)
94.6
101.6
96.8
97.7
3.7
NP-SEM(呋喃西林代謝物衍生物)
96.6
97.6
94.2
96.1
1.8
2、添加水平為 0.5mg/kg 豬肉基質(zhì)中四種硝基呋喃代謝物衍生物的紫外檢測(cè)色譜圖
圖 1 添加水平為 0.5 mg/kg 豬肉中硝基呋喃代謝物衍生物檢測(cè)的液相色譜圖