水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法
（SuperClean AL-N）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC 法作為分析方法，檢測水產(chǎn)品中孔雀石綠含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
孔雀石綠(CAS:569-64-2)
三、應用范圍
本方法適用于鮮活水產(chǎn)品中孔雀石綠的檢測的 HPLC 檢測及確證。四、參考標準
《GB/T 19857-2005 水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測定》五、實驗材料
NuAnalytical SuperClean Alumina-N 固相萃取柱 1000mg/3mL。六、實驗方法
1、 樣品待測溶液制備
準確稱取魚肉樣品 5.0 g 于 50 mL 離心管中，加入 10 mL 乙腈，超聲波振蕩提取 5 m
in，渦旋 1 min，4000r/min 離心 5 min，上清液轉(zhuǎn)移至 50 mL 離心管中,殘渣按照上述步驟
重復提取一次；合并兩次提取液，用乙腈定容至 25 mL。
2、活化
依次用 5 mL 乙腈活化
3、上樣和洗脫
在中性氧化鋁固相萃取柱上加入 5 mL 待凈化樣品，收集流出液，然后用 4 mL 乙腈洗脫，合并收集流出液。
4、重新溶解
流出液 45 ℃氮吹至近干，1 mL 乙腈定容，過 0.45 μm 濾膜，，供高效液相色譜測定。
5、HPLC 條件
色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm, 5μm) 檢測器：UV-Vis@618 nm
流動相：A-乙腈 B-0.05 mol/L 乙酸銨緩沖溶液
流速：1.2 mL/min 進樣體積: 50 μL
洗脫方式：梯度洗脫，洗脫程序如下：
|
時間/min |
A/% |
B/% |
|
0.0 |
60 |
40 |
|
3.00 |
60 |
40 |
|
3.10 |
80 |
20 |
|
10.00 |
80 |
20 |
|
10.10 |
60 |
40 |
|
13.00 |
60 |
40 |
七、實驗結(jié)果
1、0.5 mg/kg 魚肉中孔雀石綠的添加回收結(jié)果
表 1 0.5 mg/kg 魚肉中孔雀石綠的添加回收結(jié)果
名稱
1
2
3
平均回收率（%）
RSD（%）
孔雀石綠
91.0
91.8
87.2
90.0
2.73
2、添加水平為 0.5 mg/kg 魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖
圖 1 添加水平為 0.5 mg/kg 魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖
