飼料中苯甲酸檢測的固相萃取方法
(PolyClean X-MAX)
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC 法作為分析方法,檢測飼料中苯甲酸含量。該方法可簡化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用,操作簡便。
二、實驗目標物
苯甲酸 (CAS:65-85-0)
三、應用范圍
本方法適用于飼料中苯甲酸的檢測的 HPLC 檢測及確證。四、參考標準
《NY/T 2297-2012 飼料中苯甲酸和山梨酸的測定高效液相色譜法》五、實驗材料
NuAnalytical PolyClean X-MAX 固相萃取柱 60 mg/3 mL。六、實驗方法
1、 樣品待測溶液制備
準確稱取飼料樣品 2.0 g 于 50 mL 離心管中,加入 2% 氨水水溶液(v/v)21 mL,超聲
提取 10 min,振蕩提取 10min,準確加入 0.25 mol/L 的亞鐵氰化鉀溶液 2 mL、1 mol/L 的乙酸鋅溶液 2 mL,渦旋混勻。5000 r/min 離心 5min,取上清液 5 mL 轉移至 25 mL 容量瓶中, 用 2% 氨水水溶液(v/v)定容至 25 mL,備用。
2、活化
依次用 3 mL 甲醇、3mL 水活化
3、上樣和洗脫
將在MAX 固相萃取柱上加入5 mL 備用樣品,棄去流出液;用3 mL 2 %氨水水溶液(v/v)、
3mL 甲醇淋洗,棄去淋洗液;抽干小柱;用 5 %甲酸甲醇溶液(v/v)2 mL 洗脫,收集洗脫液(整個上樣、洗脫過程保持流速 1 mL/min)。
4、重新溶解
洗脫液過 0.45 μm 濾膜,供 HPLC 測定。
5、HPLC 條件
色譜柱:SuperLu C18 (250×4.6mm, 5μm)
檢測器:Waters 2487 紫外雙波長檢測器;檢測波長: 230nm
流動相 :A:乙腈 B:磷酸鹽緩沖溶液(磷酸二氫鉀 2.5g+磷酸氫二鉀 2.5 加水溶解定容到 1000mL)
洗脫方式:等度洗脫 A:B=10:90
流速:1.0 mL/min 進樣體積: 20 μL
七、實驗結果
1、25 mg/kg 飼料中苯甲酸的添加回收結果
表 1 25 mg/kg 飼料中苯甲酸的添加回收結果
名稱 |
1 |
2 |
3 |
平均回收率(%) |
RSD(%) |
苯甲酸 |
98.11 |
99.00 |
103.12 |
100.08 |
2.67 |
2、添加水平為 25 mg/kg 飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖
圖 1 添加水平為 25 mg/kg 飼料中苯甲酸檢測的液相色譜圖