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牛奶中氯霉素檢測的固相萃取方法
(SuperClean C18)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
本研究利用固相萃取作為樣品前處理方法,HPLC 作為分析方法,檢測牛奶樣品中的氯霉素殘留水平。該方法操作簡便,可簡化樣品前處理過程,減少有機(jī)溶劑的使用。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
氯霉素(CAS:56-75-7)
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于動(dòng)物源性食品中氯霉素的檢測的 HPLC 檢測及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T 22338-2008 動(dòng)物源食品中氯霉素類藥物殘留量測定》
五、實(shí)驗(yàn)材料
NuAnalytical SuperClean C18 固相萃取柱 500mg/6mL。
六、實(shí)驗(yàn)方法
1、 樣品待測溶液制備
準(zhǔn)確稱取牛奶 5 g(精確到 0.001 g),加入乙酸乙酯 15 mL,渦旋振蕩 1 min,搖床振蕩10 min。3000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 10 min。將上清液轉(zhuǎn)移至試管中,于 45 ℃氮吹吹干,用 5 mL乙腈-水溶液(5:95, v/v)溶解,待凈化。
2、活化
依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。
3、上樣和洗脫
將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中,以 1 mL/min 的流速過柱,棄去濾液。用 2×4 mL 乙腈-水溶液(5:95, v/v)淋洗固相萃取柱,棄去淋洗液,抽干 10 min。用 8 mL 乙酸乙酯洗脫固相萃取柱,收集洗脫液。
4、重新溶解
洗脫液于 45 ℃氮?dú)獯蹈桑?1 mL 乙腈-水溶液(2:8, v/v)定溶,0.22 μm 微孔濾膜過濾, 供 HPLC 測定。
5、HPLC 條件
色譜柱:SuperLu C18 (250×4.6mm,5μm)
檢測器:UV@268 nm
流動(dòng)相:A:水 B:甲醇
洗脫方式:等度洗脫,A:B=40 : 60
柱溫:室溫
流速:1.0 mL/min
進(jìn)樣量:20μL
七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、牛奶基質(zhì)中氯霉素的 0.5mg/kg 添加回收結(jié)果
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2、添加水平為 0.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中氯霉素檢測色譜圖
圖 1 添加水平為 0.5mg/kg 牛奶基質(zhì)中氯霉素檢測色譜圖