食品中喹諾酮檢測(cè)的固相萃取方法
(PolyClean X-HLB)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC法作為檢測(cè)手段。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程,節(jié)省有機(jī)溶劑的使用,操作簡(jiǎn)便。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
依諾沙星(CAS:74011-58-8),恩諾沙星(CAS:93106-60-6),培氟沙星(CAS:70458-95-6), 丹諾沙星(CAS:119478-55-6)
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于食品中喹諾酮的HPLC檢測(cè)及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T 21312-2007動(dòng)物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測(cè)方法》
五、實(shí)驗(yàn)材料
NuAnalyticalPolyCleanX-HLB固相萃取柱200mg/6mL。
六、實(shí)驗(yàn)方法
1、 樣品待測(cè)溶液制備
稱取均質(zhì)牛奶試樣5.0 g試樣(精確至0.001g)于50 mL離心管中,加入20 mLEDTA-Mellvaine緩沖溶液,1000r/min渦旋混合1min,超聲提取10min,10000r/min離心5 min(溫度低于5 ℃),提取三次合并上清液。
2、活化
依次用6 mL甲醇和6 mL水活化。
3、上樣和洗脫
將提取液以2 mL/min的速度過(guò)柱,棄去濾液,用2 mL5%甲醇水溶液淋洗,棄去淋洗
液,將小柱抽干,再用6 mL甲醇洗脫并收集洗脫液。
4、重新溶解
50℃緩慢氮?dú)饬鳁l件下吹至近干,用1 mL 0.2 %甲酸水溶液溶解。1000 r/min渦旋混合1 min,經(jīng)0.45 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾,供HPLC測(cè)定。
5、HPLC條件
色譜柱:SuperLu C18 (250×4.6mm,5μm)
檢測(cè)器:UV@254 nm
流動(dòng)相:A: 乙腈 B:0.1%甲酸的水溶液
柱溫:室溫
流速:1.0mL/min
進(jìn)樣量:20μL
洗脫方式:梯度洗脫,洗脫程序如下:
時(shí)間/min |
A/% |
B/% |
0.00 |
9 |
91 |
11 |
9 |
91 |
20 |
29 |
71 |
25 |
37 |
63 |
26 |
100 |
0 |
30 |
100 |
0 |
31 |
9 |
91 |
36 |
9 |
91 |
七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
表1 1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮的添加回收結(jié)果
名稱 |
平均回收率(%) |
依諾沙星 |
92.8 |
丹諾沙星 |
82.4 |
培氟沙星 |
93.8 |
恩諾沙星 |
81.2 |
2、添加水平為1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮檢測(cè)色譜圖
圖1 添加水平為1mg/kg牛奶基質(zhì)中喹諾酮檢測(cè)色譜圖