一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC 法作為分析方法,檢測食品中赭曲霉毒素的殘留。該方法可簡化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用, 操作簡便。
二、實驗目標物
赭曲霉毒素(CAS:303-47-9)。
三、應用范圍
本方法適用于糧油中赭曲霉毒素 A 殘留的 HPLC 檢測及確證。
四、參考標準
GB5009.96—2016《食品安全國家標準 食品中赭曲霉毒素 A 的測定》。
五、實驗材料
廣州菲羅門(FLM) Polyclean X-MAX 150 mg/6 mL(貨號:9B-P003-06150)。
六、實驗方法
1、樣品提取
珍珠米
準確稱取粉碎好珍珠米 5.0 g 置于 50 mL 離心管中,加入 25 mL 提取液(0.1mol/L 氫氧化鉀溶液:甲醇:水=2:60:38),于振蕩器振蕩提取 20 min,4000 r/min 離心 5 min,取上層液 5 mL 備用。
醬油
準確稱取醬油 5.0 g 置于 50 mL 離心管中,加入 20 mL 提取液(同 1.1),于振蕩器中提取 20 min,4000 r/min 離心 5 min,取 5 mL 提取液備用。
2、SPE 柱凈化
(1)活化:Polyclean X-MAX 小柱使用前用 5 mL 甲醇活化,3 mL 水,3 mL 提取液(同 1.1)平衡。
(2)上樣和洗脫:取 5 mL 備用液過柱,棄去流出液;分別加 3 mL 淋洗液(0.1mol/L 氫氧化鉀溶液:乙腈:水=3:50:47),3 mL 水,3 mL 甲醇淋洗小柱,棄去流出液, 抽干小柱;用 5 mL 洗脫液(甲醇:乙腈:甲酸:水=40:50:7.5:2.5)洗脫,收集洗脫液(整個上樣、洗脫過程控制流速在 1 mL/min 內)。
(3)上機測試:洗脫液于 50 °C 下用氮氣吹干,用 1 mL 初始流動相(2 %乙酸水: 乙腈=50.5:49.5)定容,經 0.22 μm 濾膜過濾,供上機測試。
3、HPLC 條件
設備:Waters Alliance 2695
色譜柱:SuperLu C18 (4.6 mm×250 mm,5μm),也可用其它規格 C18 柱檢測器:Waters 2475 熒光檢測器
檢測波長:激發波長 333 nm 發射波長 477 nm 等度洗脫: A:2 %乙酸水 B:乙腈=50.5:49.5 洗脫方式:等度洗脫, A : B=50.5 : 49.5
流速:1.0 mL/min
進樣體積:20 μL
1、4.0 μg/kg 食品基質中赭曲霉毒素的添加回收結果 表 1 4.0 μg/kg 食品基質中赭曲霉毒素的添加回收結果
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2、 添加水平為 4.0 μg/kg 赭曲霉毒素檢測的液相色譜圖 |
七、實驗結果
圖 1 添加水平為 4.0 μg/kg 赭曲霉毒素檢測的液相色譜圖